聚丙烯酰胺凝胶电泳(浓缩胶中为什么会被压缩成层)
应用介绍
浓缩胶是在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中,同一介质的凝胶浓度分为 两种,负极的加样侧一般浓度为2%〜5%, 称为浓缩胶,其余部分浓度为6%〜8%, 称为分离胶。
由于浓缩胶浓度低、孔径大, 而分离胶浓度高、孔径小。
带电荷的蛋白质 或核酸离子在大孔径胶中移动时阻力小,移动速度快,当接近小孔径的分离胶时,遇到的阻力大,移动速度减慢而使样品浓缩,形 成一条狭窄区带,以减少电泳过程中的谱 带扩散。
浓缩胶与分离胶的pH值不同也呵 以强化样品的浓缩作用。
浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。
当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。
蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。
大大提高了电泳的灵敏度。
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